丙酮酸（PA）測(cè)定試劑盒 微量法
測(cè)定意義：丙酮酸通過(guò)乙酰CoA連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝，起著重要的樞紐作用。
測(cè)定原理：丙酮酸與2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在堿性溶液中呈櫻紅色。
需要的儀器，耗材:可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、蒸餾水。
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丙酮酸提?。?1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次），靜置 30min， 8000g，25℃離心 10min，取上清待測(cè)。 2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，靜置 30min，8000g，25℃離心 10min，取上清待測(cè)。 3、血清（漿）樣品：按照血清（漿）體積（mL）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議取 0.1mL 血清（漿）加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，靜置 30min， 8000g，25℃離心 10min，取上清待測(cè)。
丙酮酸含量計(jì)算： a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下 1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定回歸方程為 y = 0.0466x + 0.0675； x 為丙酮酸鈉含量（µg/mL），y 為吸光值。 2、按照血清（漿）體積計(jì)算丙酮酸含量（μg/mL）= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（V3×V1÷V2）=214.6×(A-0.0675) 3、按照蛋白濃度計(jì)算丙酮酸含量（μg/mg prot）=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr 4、按照樣品質(zhì)量計(jì)算丙酮酸含量（µg/g 鮮重）= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2）=21.46×(A-0.0675) ÷W 3、按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算丙酮酸含量（μg/104 cell）＝[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷（500×V1÷V2）=0.043×(A-0.0675)
相關(guān)文獻(xiàn)：
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