乙酰膽堿酯酶(AchE)測(cè)定試劑盒 微量法
測(cè)定意義:AchE屬于絲氨酸水解酶,廣泛存在于各種動(dòng)物組織和血清中。AchE催化乙酰膽堿(Ach)水解,在神經(jīng)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)中起重要作用。
測(cè)定原理:AchE催化Ach水解生成膽堿,膽堿與二硫?qū)ο趸郊姿幔―TNB)作用生成5-巰基-硝基苯甲酸(TNB);TNB在412nm處有吸收峰,通過測(cè)定412 nm吸光度增加速率,計(jì)算AchE活性。
需要的儀器,耗材:紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。
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?乙酰膽堿酯酶(AchE)測(cè)定試劑盒 微量法
微量法
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
貨號(hào):BC2025
規(guī)格:100 管/96 樣
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1 瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入 1.3mL 試劑二,充分震蕩溶解。
試劑四:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入 1.3mL 試劑二,充分震蕩溶解。
產(chǎn)品說明: AchE 屬于絲氨酸水解酶,廣泛存在于各種動(dòng)物組織和血清中。AchE 催化乙酰膽堿(Ach)水 解,在神經(jīng)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)中起重要作用。 AchE 催化 Ach 水解生成膽堿,膽堿與二硫?qū)ο趸郊姿幔―TNB)作用生成 5-巰基-硝基苯甲 酸(TNB);TNB 在 412nm 處有吸收峰,通過測(cè)定 412nm 吸光度增加速率,計(jì)算 AchE 活性。 自備儀器和用品: 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍和蒸 餾水。
操作步驟:
一、粗酶液提取:
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,8000g4℃離心 10min,取上清液待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬 細(xì)胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min); 然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體:直接測(cè)定。
二、測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長到 412nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于 37℃水浴中預(yù)熱 30min。
3. 空白管:取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 20μL 蒸餾水、 160μL 試劑二、 10μL 試劑三和 10μL 試劑四,迅速混勻,于 412nm 處測(cè)定 3min 內(nèi)吸光值變化,第 10s 吸光值記為 A1,第 190s 吸光 值記為 A2?!鰽 空白管=A2-A1 4. 測(cè)定管:取微量石英比色皿/96 孔板,依次加入 20μL 上清、160μL 試劑二、10μL 試劑三和 10μL 試劑四,迅速混勻,于 412nm 處測(cè)定 3min 內(nèi)吸光值變化,第 10s 吸光值記為 A3,第 190s 吸光 值記為 A4?!鰽 空白管=A4-A3
注意:空白管只需測(cè)定一次
相關(guān)文獻(xiàn):
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